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在新冠疫情防控期间如何安全检测疟疾患者血样?

作者:河南健康管理师培训|报名_健康管理师学习|费用|考试政策-元康职业培训学校发布时间:2021-04-30浏览量:40

目前全球新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情不断蔓延,自境外疟疾流行区入境人员存在疟原虫及新冠病毒双重感染风险,为及时、准确、安全地开展疟疾检测,保障输入性疟疾的早发现、早诊断和早治疗,笔者提出在COVID-19疫情防控期间,疟疾患者血样检测工作中需提高生物安全防护级别、优先采用快速诊断检测(RDT)和核酸检测方法、至少两种检测方法结果一致作为虫种确认依据、实施血片特殊制备的方法等建议,供各临床和疾控实验室参考。






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对尚未排除新冠病毒肺炎(COVID-19)还是疟疾的患者,应该怎么办?
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建议临床实验室在开展新冠病毒检测和诊断的同时,采集或对已采集的患者血样开展疟原虫检测,此类高危血样的采集、运输、处理、保存和检测等操作流程及生物安全防护要求,实验室需严格参照国家卫生健康委办公厅印发的《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第二版)》和《新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)》(以下分别简称 《技术指南》和《安全指南》,总称 《指南》 操作。


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高危样品疟疾临床检测优先方法?
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高危样品的疟疾临床检测优先采用快速诊断检测(RDT)和核酸2种方法,RDT检测方法敏感性高、操作简单、步骤少,在世界各地被广泛采用。世卫组织亦推荐在当前严峻的新冠病毒疫情形势下,在镜检和RDT两种方法间,应优先选择后者,用于疟疾病例的筛查和诊断,该检测过程无需特别培训即可掌握。其检测过程需在生物安全二级实验室内完成操作,并采取生物安全三级个人防护。核酸检测方法以其较高的敏感性、特异性及可同时准确地检测出所有疟原虫种类的优势,一直在疟疾病例的复核确认中发挥着关键作用。核酸检测的首要内容是制备病原体的核酸样品,而核酸样品制备的第一步是通过加热或/和溶剂裂解样品,该过程可有效灭活病毒,使其后续操作相对安全。同时,核酸提取和检测的操作过程与新冠病毒检测样品类似,可以由新冠病毒检测人员同时完成。根据《指南》要求样品采取病毒灭活措施前及核酸提取过程需在生物安全二级实验室内操作,同时采取生物安全三级个人防护,核酸检测时,采用二级个人防护即可。


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3种检测方法各有什么优缺点?
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疟原虫常用的3种检测方法各有优缺点,又互为补充,需应用多种检测方法对疟疾病例进行复核确认。通常RDT方法敏感性较高,但假阳性率也较高,如恶性疟患者抗疟药治疗后,富组氨酸蛋白酶2 (HRP2)可体内长时间存在从而使RDT检测结果呈假阳性。另外,RDT 检测不能有效区分其他虫种。同时还存在因HRP2(富组氨酸蛋白酶2)和/或HRP3(富组氨酸蛋白酶3)基因缺失而呈假阴性的病例。核酸方法可准确区分不同虫种,但其操作复杂,需要特殊的仪器设备和专门的人员,有时会存在操作不当及样品间的人为交叉污染。镜检特异性高,是疟疾诊断的金标准,有时仅用该方法即可对疟疾病例予以诊断,但其敏感性在3种方法中最低,有时也会因镜检人员个人水平和血片质量等原因造成误判。


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高危血样中的虫种如何确认?
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新冠疫情期间,疾控部门开展疟疾病例复核时应至少基于上述2种检测方法结果进行判断;若采用的2种检测方法的检测结果一致时,在疫情期间可不必再采用第3种方法检测。


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如何使用高危血样涂制血片?
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答:冠状病毒对有机溶剂、洗涤剂等敏感,如一定浓度的乙醇、异丙醇、次氯酸钠、过氧化氢等均可在短时间内灭活冠状病毒,而Triton X-100(一种非离子型表面活性剂)和Tween 80(吐温80)等被证明对冠状病毒具有很好的灭活作用。

厚血膜制备方法为:①不采取溶血步骤;②制备40 ml吉氏工作液, 加入2 ml 5% Triton X-100,充分混匀,对血膜染色45~60 min;③ 制备40 ml洗涤缓冲溶液,加入2滴5% Triton X-100,轻轻搅拌漂洗血膜 5 min。 

薄血膜制备方法为:①将血膜于100%甲醇中固定15~30 min,然后干燥;②制备40 ml吉氏工作液,加入2滴5% Triton X-100并混匀,然后染色血膜45 min;③制备40 ml洗涤缓冲溶液,加入2滴5% Triton X-100,在不断轻轻搅拌的前提下漂洗血膜5 min。应用该方案制备薄血膜时,使用甲醇进行固定的时间较长,且甲醇挥发性较强, 为避免厚血膜也被甲醇固定,厚薄血膜需分别制备,切不可制备在同一张血片上。


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